人SUMO病毒载体构建及稳转神经母细胞瘤SHSY5Y细胞系的建立

摘要

cqvip:目的构建表达人小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)基因的逆转录病毒载体,并观察其稳定感染神经母细胞瘤SHSY5Y细胞后SUMO蛋白的表达情况。方法用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA3.0-HA-SUMO2、pcDNA 3.0-HA-SUMO3质粒,得到3×Flag-SUMOs基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化获取逆转录病毒颗粒。将逆转录病毒颗粒感染SHSY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出。Western blot检测稳定转染的pBabe-3×Flag-SUMOs-SHSY5Y单克隆细胞SUMO1～3的表达。结果 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro质粒构建正确。稳定转染的SHSY5Y细胞系3×Flag-SUMOs表达明显增强。结论成功构建了稳定表达SUMO的pBabe-3×Flag-SUMOs-SHSY5Y细胞系。