禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达及间接ELISA的构建

摘要

禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失.为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4的ELISA方法.根据禽腺病毒4型SDJN0105株Fiber-2基因的核苷酸序列,经序列优化后合成1440 bp基因序列,连入pET-30a(+)载体构建pET-30a(+)-Fiber-2重组质粒,在BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达Fiber-2蛋白,利用亲和层析柱纯化重组Fiber-2蛋白,经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定后,以Fiber-2蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化建立检测禽腺病毒4型抗体的间接ELISA方法.结果表明,获得了以上清形式表达的重组Fiber-2蛋白,Western-Blot鉴定表明重组Fi-ber-2蛋白具有良好的免疫学活性;重组Fiber-2蛋白的最佳包被浓度为4.0μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:400;该方法特异性好,仅与禽腺病毒4型阳性抗体发生反应,敏感度可达1:6400;批内和批间重复性变异系数均小于5％;构建的间接ELISA试剂盒在4°C环境下放置12个月仍然有效.本研究建立的禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、保质期长,可用于禽腺病毒4型的监测和流行病学调查.