青钱柳愈伤组织的离体保存

摘要

[目的]在优化植物激素的基础上,通过添加渗透调节剂和生长抑制剂,探索青钱柳愈伤组织离体保存的方法,为青钱柳种质资源的长期离体保存提供理论依据和技术支撑.[方法]以青钱柳愈伤组织为试验材料,采用二因素完全随机法优化培养基内6-BA(0.4、0.6、0.8、1.0mg·L-1) +IBA(0.2、0.4 mg·L-1)浓度组合;在此基础上,采用单因素完全随机法,针对不同蔗糖浓度(30、45、50、55、60 g·L-1)及其保存时间(60、90、120、150、180天)、不同渗透调节剂浓度(甘露醇:0、10、20、30、40、50 g·L-1;肌醇:0、10、20、30、40、50 g·L-1)及不同生长抑制剂浓度(多效唑(PP333):0、2、4、6、8、10 mg· L-1;丁酰肼(B9):0、2、4、6、8、10 mg·L-1)开展愈伤组织离体保存试验.在保存过程中,结合流式细胞术和SSR分子标记技术,检测不同保存代数下愈伤组织的细胞倍性和遗传稳定性,并对保存第15代的愈伤组织进行恢复生长试验.[结果]通过对6-BA+IBA浓度组合、渗透调节剂、生长抑制剂的筛选,改良MS+0.8 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1IBA+45 g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1琼脂粉(pH5.8)是适宜的青钱柳愈伤组织离体保存培养基,该培养基可有效地限制青钱柳愈伤组织生长;90天为适宜的继代保存时间,愈伤组织存活率为100％;愈伤组织呈黄绿色,颗粒状、颗粒小且疏松.与对照组(叶片)相比,不同保存代数下愈伤组织的细胞倍性没有发生改变,遗传稳定性好.保存的愈伤组织均能恢复生长,在形态、生活力和生长势方面表现好,并能够分化.[结论]适宜的青钱柳愈伤组织离体保存的培养基为改良MS基本培养基+0.8 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1IBA+45g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1琼脂粉,pH5.8,在(20±1)℃下每隔90天转接1次,是青钱柳愈伤组织离体保存继代的最佳途径;保存的愈伤组织遗传稳定性好、未发生变异.甘露醇、肌醇、多效唑和丁酰肼等添加剂均不利于青钱柳愈伤组织的离体保存.