基因重组毕赤酵母表达瑞替普酶的研究

摘要

对溶栓药物瑞替普酶在重组毕赤酵母中的表达进行了研究.摇瓶培养时,对pH、甲醇浓度和诱导相起始OD600 nm进行三因子四水平L16(43)的正交实验.结果表明,甲醇浓度的影响最显著.表达量最高的组合为A2B4C4,生长最好的组合为A2B4C2.验证实验显示,A2 B4 C4的表达量为7.72 mg/L,A2B4C2达到的干重为44.8 g/L.高密度培养结果表明.诱导相最佳甲醇浓度为4‰左右.此时,菌体各阶段的平均比生长速率μ均为最大,表达量也最高,为435.6 nag/L.同时,诱导相pH为6.5时rPA的表达量最高,达到487.0 rag/L.研究发现,pH为4.5和6.5时,39 ku、41 ku和60 ku的蛋白质间存在反对应关系,初步猜测它们之间可能存在某种修饰关系,需要进一步研究.