尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系

摘要

为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌（GBS）荚膜多糖合成基因的表达及其与英膜唾液酸含量、菌株致病性的关系，本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因epsE、cpsK和neuA，通过qPCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化，同时，通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化，通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示，cpsE、cpsK和neuA编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点，CpsE、NeuA与已知鱼源GBS（Ia和Ib型）和人源GBS（Ia、Ib和II～IX型）相应序列的同源性均达到97％以上，而CpsK与鱼源、人源的序列同源性则分别为56％～100％和27％～100％。在不同培养温度下GBS、cpsK和neuA表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致；在较高温度（28和34℃）下培养的GBS英膜唾液酸含量、菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增，而在22℃下培养的GBS唾液酸含量最高，攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。该研究结果表明，GBSCpsK和NeuA在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用，较低温度下GBS荚膜唾液酸的高含量有助于其在宿主体内的潜伏，而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。