甲状旁腺相关肽调控骨骺干细胞后的stathmin表达

摘要

目的 研究甲状旁腺相关肽全长及部分肽段PTHrp(107-139)对体外培养的骨骺干细胞的调控作用并检测调控后stathmin的表达.方法 利用免疫磁珠分选细胞的方法,分离出原代骨骺干细胞.转化、提取、鉴定所需的三种质粒.用脂质体介导法将质粒转染入骨骺干细胞,通过G418筛选得到抗性克隆并将其分别扩增培养,并加入1.0p g/ml的强力霉素进行诱导,并设置空白对照.转染后第4小时以及24、72、96小时对各组细胞用Western-blot检测stathmin的表达水平,并抽提各组细胞的RNA进行逆转录,然后通过RT-PCR的方法检测细胞内stathmin的mRNA表达变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果 Tet-on基因表达系统能准确的调控骨骺干细胞中的基因表达.质粒转染后骨骺干细胞数量明显增多.PTHrp全长及部分肽段质粒转染实验组,其骨骺干细胞中stathmin的蛋白水平和mRNA水平均逐渐增加,且增高程度大致相当,空白对照组无明显变化.结论 甲状旁腺相关肽及其肽段PTHrp(107-139)均可能有促进骨骺干细胞增殖的作用,stathmin在调控中出现高表达,提示细胞增殖.