miR-654-3p靶向GMFB抑制骨肉瘤细胞增殖的作用及机制研究

摘要

目的探究miR-654-3p对骨肉瘤细胞增殖的影响,预测其靶基因并评估靶基因对骨肉瘤患者生存预后的干预情况。方法选择GEO数据库中GSE70367数据集进行差异分析,筛选骨肉瘤细胞中异常表达的miRNA,通过RT-qPCR检测miR-654-3p在骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2和HOS中的表达情况。通过TargetScan和miRmap数据库预测miR-654-3p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-654-3p与GMFB基因的结合。用CCK8实验和CFU实验分析miR-654-3p和GMFB对骨肉瘤细胞MG-63和HOS增殖的影响。下载TCGA数据库中肉瘤患者的GMFB表达数据和临床信息,通过R软件包绘制GMFB对生存预后影响的KM曲线以及预测肉瘤患者1年、3年和5年生存率的列线图。结果与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2和HOS中miR-654-3p的表达均明显降低(P<0.05)。miR-654-3p与GMFB基因结合,并负调控GMFB的表达。miR-654-3p模拟物在体外明显抑制骨肉瘤细胞的增殖,而GMFB转染能够逆转抑制作用(P<0.05)。GMFB高表达的骨肉瘤患者的总体生存率明显低于低表达患者(P<0.05),且通过列线图能够预测患者的1年、3年和5年生存率。结论miR-654-3p通过靶向负调控GMFB基因表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖,且GMFB高表达与骨肉瘤患者的预后呈负相关。