日本沼虾(Macrobrachium nipponense)组蛋白酶B基因克隆及其在组织和卵巢发育过程中的表达

摘要

组蛋白酶B广泛存在于生物体内,与免疫、消化和繁殖等生理功能息息相关.为了研究组蛋白酶B在甲壳动物体内的作用尤其在卵巢发育过程中的作用,本研究采用3 'RACE和5'RACE技术,首次克隆获得日本沼虾(Macrobrachium nipponense)组蛋白酶B(简称MnCB)基因cDNA全长,并采用实时荧光定量(qPCR)测定了MnCB在日本沼虾不同组织中和卵巢发育过程中mRNA的表达量.序列结果分析表明:MnCB序列含有12 bp的5'-UTR,996 bp的ORF和702 bp的3'-UTR.ORF共编码331个氨基酸的多肽,此多肽由16个氨基酸的信号肽、63个氨基酸的前导肽和252个氨基酸的成熟肽组成,其理论pI为6.36,分子量为36.5KDa.qPCR的结果表明:MnCB在测定的所有组织中均有表达,在心脏中表达量最高,肌肉、肝胰腺和胸神经节中表达量中等,肠、鳃和血细胞中的表达量较低.MnCB的表达量在卵巢的发育过程中逐步升高,卵巢发育至初级卵黄发生期(Ⅲ期)MnCB的表达量显著增加(P＜0.05),次级卵黄发生期(Ⅳ期)表达量继续增加,并增至最大值,Ⅳ期与Ⅲ期表达量差异不显著(P＞0.05),成熟期(V期)表达量显著下降(P＜0.05).上述研究结果表明MnCB广泛存在于日本沼虾的组织中,并且参与卵黄蛋白原或卵黄蛋白的水解.