α干扰素通过p53依赖性通路增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡

摘要

目的探讨α干扰素（IFNα）对阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法采用α干扰素（IFN）和阿霉素单独或联合处理骨肉瘤U2OS和MG63细胞72 h, 通过MTT法测定细胞生长抑制, 应用流式细胞术、Hochest 33258荧光染色和DNA Ladder检测细胞凋亡, 免疫印迹法检测聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（PARP）、凋亡相关蛋白（p53、Bax、Bcl-2、Mdm2、p21、Caspase-3）和PARP的表达, 实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测p53在mRNA水平的表达, 通过siRNA干扰进行p53的表达沉默。结果 IFNα本身对U2OS和MG63无细胞毒作用, 但在p53正常的U2OS而非p53突变的MG63细胞中增强阿霉素引起的细胞毒作用和凋亡, 在IFNα+阿霉素组的U2OS细胞出现更明显的凋亡形态学改变和DNA梯形条带。在U2OS细胞中, IFNα对各基因的表达无影响, p53、Bax、Mdm2、p21可被阿霉素上调, 并被联合用药进一步增强。而Bcl-2在阿霉素作用后下调, 并被联合用药进一步下调, 在MG63细胞中, 各基因的表达无明显变化。在U2OS细胞中转染p53-siRNA阻断了p53的表达, 经联合用药处理72 h后, 较空白组和对照siRNA组, 转染p53-siRNA组的细胞活力明显增高明显, 并且相对于对照siRNA组, 联合用药引起的caspase-3和PARP的活化也在p53-siRNA组明显减弱。结论 IFNα可通过p53依赖性凋亡途径增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡, 联合IFNα生物治疗和化疗可望应用于骨肉瘤的治疗。