温肾壮阳方含药血清调控HIF-1α/VEGF通路对髓核细胞凋亡与增殖的影响

摘要

目的 探讨温肾壮阳方含药血清对髓核细胞凋亡、增殖及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子（VEGF）通路的影响。方法 将25只SD雄性大鼠随机分为5组，分别用生理盐水、依托考昔溶液及低、中、高浓度温肾壮阳方进行灌胃7 d制备相应含药血清。取人髓核细胞，实验分为6组：空白对照组用正常大鼠血清培养，缺氧造模组用300μmol/L氯化钴（CoCl2）溶液干预24 h诱导缺氧状态，依托考昔组用300μmol/L CoCl2+依托考昔含药血清同时干预24 h,低、中、高浓度温肾壮阳方组分别用300μmol/L CoCl2+相应浓度肾壮阳方含药血清同时干预24 h。采用CCK-8实验检测细胞生存率，采用Western blot法和qPCR法检测细胞中HIF-1α、VEGF、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、p53蛋白与mRNA表达情况，流式细胞术检测髓核间充质干细胞（NPSCs）增殖情况。结果 缺氧诱导各组细胞存活率均明显低于空白对照组（P均＜0.05）,中浓度温肾壮阳方组、高浓度温肾壮阳方组的细胞存活率均明显高于缺氧造模组（P均＜0.05）。缺氧造模组细胞中HIF-1α、VEGF、Caspase-1、p53蛋白及mRNA相对表达量均明显高于空白对照组（P均＜0.05）;依托考昔组HIF-1α蛋白及mRNA相对表达量均明显高于缺氧造模组（P均＜0.05）,VEGF、Caspase-1、p53蛋白及mRNA相对表达量与缺氧造模组比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）;温肾壮阳方各组HIF-1α蛋白及mRNA相对表达量与缺氧造模组比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）,VEGF蛋白及mRNA相对表达量均明显高于缺氧造模组（P均＜0.05）;中浓度温肾壮阳方组、高浓度温肾壮阳方组Caspase-1、p53蛋白及mRNA相对表达量均明显低于缺氧造模组（P均＜0.05）。各造模组NPSCs占比均明显低于空白对照组（P均＜0.05）,中浓度温肾壮阳方组NPSCs占比明显高于缺氧造模组、依托考昔组、高浓度温肾壮阳方组（P均＜0.05）。结论 温肾壮阳方对缺氧诱导的髓核细胞有保护作用，可促进NPSCs增殖，减少细胞凋亡，且可特异性促进VEGF的表达，有利于血管的分化与生成。