时间分辨荧光免疫层析法定量检测谷物中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮残留

摘要

建立了一种快速定量检测谷物产品中黄曲霉毒素(Aflatoxin B1,AFB1)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的时间分辨荧光免疫层析方法.采用时间分辨荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体和玉米赤霉烯酮抗体,研究了如pH值、标记抗体浓度、荧光探针使用量、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠IgG浓度、样品前处理方法等因素对时间分辨荧光免疫层析方法灵敏度的影响.结果表明:AFB1的检出限为0.80 ng/mL,线性范围(IC20～IC80)为0.81～5.67 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为2.15 ng/mL.在ZEN检出限为4.58 ng/mL,线性范围(IC20～IC80)为4.76～85.60 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为20.19 ng/mL.方法特异性良好,与T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马毒素、赭曲霉毒素A多种真菌毒素交叉率小于10％.通过选择玉米、麦麸、大豆、小麦进行添加回收试验,AFB1的添加回收率在97.1％～108.7％之间,ZEN的添加回收率在92.8％～109.1％之间,相对标准偏差小于15％.选取经HPLC-MS/MS检测过的FAPAS标准质控样本进行测试,检测结果与其结果一致.在实际产品检测对比中,与市售胶体金免疫层析卡,ELISA试剂盒的检测结果基本一致.本方法操作简单快速、可定量,检测过程约25 min,适用于谷物样品中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的现场快速筛.