钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的重组表达及纯化

摘要

目的 :构建L32 pQE32重组质粒 ,诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32 ,对重组蛋白进行纯化。方法 :采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段 ,构建重组克隆载体 pGEM T/L32和表达载体L32 pQE32 ,转化受体菌E .coliDH5α和E .coliM15 ,IPTG诱导表达重组LipL32蛋白。Ni NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白。 结果 :扩增出约 75 0bp的LipL32成熟蛋白基因 ,LipL32基因插入pQE32表达载体 ,表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子质量约为 310 0 0 ,与预期大小一致。Western印迹显示能与钩体抗血清特异结合。结论 :LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达 ,Ni NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白 ,重组Li pL32蛋白具有结合活性。