含有RSV G蛋白片段和CTL表位融合蛋白的表达及纯化

摘要

目的:构建表达呼吸道合胞病毒（RSV）G蛋白片段（G126,来自100～225氨基酸）和来自RSVM2蛋白的CTL表位的原核表达质粒,探索适宜的表达和纯化条件,获得融合表达产物,为进行体内外实验检测奠定基础。方法:利用PCR技术,从质粒pUC18（G10）、pUC18（CTL）中扩增G126和CTL基因,通过DNA重组技术构建含DsbA G126Linker CTL（DsbA GLC）融合基因的表达载体pET（GLC）。转化宿主菌E.coliBL21（DE3）plysS进行诱导表达,并采用亲和层析纯化目的蛋白。结果:DsbA GLC在E.coliBL21（DE3）plysS中可获得高效表达,表达量可达菌体总蛋白的21%。通过可溶性测试,DsbA GLC能以可溶性形式表达。纯化后目的蛋白的纯度可达到95%以上。结论:实现RSVG126和M2蛋白CTL表位的融合表达,所获得的重组蛋白可作为抗原用于RSV重组蛋白疫苗的筛选。