冬季刺参养殖环境与肠道内细菌菌群的研究

摘要

运用传统细菌分离培养与分子生物学技术相结合的方法, 对2008年11月至2009年1月冬季刺参(Apostichopus japonicus Liao)养殖池塘环境(养殖水、底泥、附着基)及刺参肠道内的细菌菌群进行了分析.应用平板稀释涂布培养计数法测得刺参养殖池塘水体、底泥、附着基和肠道细菌数量分别为0.75×102～1.4×104 cfu/mL、8.7×104 ～8.1×105 cfu/g、3.8×105～2.8×106 cfu/g、7.1×105～ 1.5×107 cfu/g; 根据形态学差异从培养所得的细菌中筛选得到22株菌, 用限制性内切酶Rsa I和Msp I对所分离菌株进行ARDRA (Amplified rDNA Restriction Analysis)分析, 这22株菌被分为8种不同的分类单元(Operational Taxonomic Unit, OTU), 其中OTU2与OTU3所包含的菌株分别占分离菌株种数的30%和20%; 此外, 作者对不同环境培养所得的优势度最高的细菌进行分子鉴定分析.结果表明: 水环境中优势菌为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)及巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium), 沉积物中优势菌为巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、施氏假单胞菌(P.stutzeri)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis), 附着基中优势菌为巨大芽孢杆菌(B. megaterium)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis), 灿烂弧菌(Vibrio splendidus), 肠道中优势菌为巨大芽孢杆菌(B. megaterium)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis), 灿烂弧菌(V. splendidus)、施氏假单胞菌(P.stutzeri).通过对冬季刺参池塘细菌菌群多样性分析和优势菌鉴定, 为筛选低温益生菌和防治刺参疾病提供了有益参考.