双组分核定位信号介导Apoptin定位于肿瘤细胞核

摘要

Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的小蛋白,在肿瘤细胞中定位于细胞核,而在正常细胞中主要分布于细胞质.根据预测,Apoptin分子中有2段序列(NLS1和NLS2)可能是单组分核定位信号.通过基因突变和缺失构建了Apoptin各种不同的核定位信号突变体和磷酸化突变体,利用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作标签,观察了其在肿瘤细胞中亚细胞定位的变化.结果表明,NLS1和NLS2单独均不是有效的单组分核定位信号.Apoptin的核定位信号是由NLS1和NLS2这2段序列共同组成的双组分核定位信号,缺少任何一段序列都会严重影响Apoptin在肿瘤细胞中的核定位.其中,NLS2对于Apoptin的核定位起主要作用.Apoptin的获得型磷酸化突变体并不能转位到正常细胞的细胞核中,而其磷酸化负突变体仍定位于肿瘤细胞的细胞核.另外,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂H7也不影响Apoptin在肿瘤细胞中的核定位.很可能,Apoptin的磷酸化并不参与调控其核定位信号的功能.