SYAP1真核表达载体的构建及蛋白表达定位

摘要

目的:构建pcDNA3.1(-)-Myc-突触相关蛋白1(SYAP1)真核表达载体。方法:合成SYAP1基因序列,加入Myc标签序列、EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点,并与线性化pcDNA3.1(-)连接,得重组质粒pcDNA3.1(-)-Myc-SYAP1。重组质粒经菌落PCR、酶切及测序鉴定正确后,脂质体转染HEK293细胞,采用Western blot和间接免疫荧光法检测转染细胞中SYAP1蛋白的表达及定位情况。结果:Myc-SYAP1成功插入pcDNA3.1(-)载体,SYAP1蛋白成功表达且定位于胞浆。结论:pcDNA3.1(-)-Myc-SYAP1载体构建成功。