不同基因型鹅星状病毒鉴别诊断RT-PCR方法的建立

摘要

鹅星状病毒(GAstV)是近年临床新发病原,也是导致当前雏鹅痛风致死的主要病因,研究显示该病毒存在两种不同基因型.为建立快速准确的核酸鉴别诊断方法,本研究针对不同基因型GAstV保守域RNA依赖性RNA聚合酶序列各设计1对特异性引物,建立以RNA为模板的双重一步法RT-PCR检测方法.条件优化试验结果显示,双重RT-PCR方法彼此无干扰;引物特异性强,对坦布苏病毒、鹅细小病毒、呼肠孤病毒、鸭瘟病毒的检测均为阴性;体系中引物适宜浓度为1μmol,退火温度范围广,50～54°C皆可;敏感性高,最低检测限分别为103拷贝数和102拷贝数.对采集自江浙地区的73份样品进行检测,结果显示,鹅星状病毒阳性率为93.2％,主要为Ⅱ型星状病毒的单一感染(阳性率86.3％),部分样品呈现两种类型星状病毒混合感染现象(阳性率6.8％).上述结果表明本研究建立的双重RT-PCR方法可用于GAstV的鉴别诊断和分子流行病学调查.