水稻种子特异表达启动子Ole18的克隆、序列分析及功能验证

摘要

[目的]克隆水稻种子特异表达启动子Ole18,为实现外源基因在水稻胚、糊粉层特异表达奠定基础。[方法]采用PCR克隆扬稻6号Ole18启动子序列,并连接至p MD20-T载体上,经PCR验证后进行测序,并对测序结果进行生物信息学分析;用克隆获得的Ole18启动子取代p CAMBIA1301载体中GUS基因上游的Ca MV35S启动子构建重组表达载体,经农杆菌介导转化台粳9号,获得转基因植株,对其种子进行GUS染色。[结果]克隆获得大小为1261 bp的Ole18启动子序列,与japonica cultivar-group、IR36的18 k D Oleosin基因启动子同源性为99%。启动子预测软件NNPP推测该序列具有启动子的功能,含有种子特异表达启动子所必需的TATA-box、CAAT-box等顺式调控元件。GUS组织化学染色结果表明,该启动子序列能够驱动GUS基因在水稻种子胚及糊粉层中表达。[结论]克隆获得的Ole18启动子具有启动活性,且具有胚及糊粉层特异性表达功能。