缺氧诱导巨噬细胞来源外泌体的提取与鉴定

摘要

目的分析缺氧诱导巨噬细胞分泌产生外泌体,并对外泌体的形态特征进行分析鉴定。方法首先采用佛波酯诱导THP-1细胞促使其分化成为巨噬细胞,分别收集缺氧干预0,12,24 h的巨噬细胞源性外泌体,通过BCA方法提取外泌体蛋白,使用Western blot方法测定分析外泌体阴性对照蛋白Histone和外泌体表面标志蛋白CD63和HSP70的表达。利用透射电子显微镜及Nanosight NS300仪分析外泌体的形态、特征及粒径大小。结果与缺氧干预0 h及12 h相比,缺氧干预24 h所得的巨噬细胞源性外泌体蛋白含量、CD63及HSP70的表达升高(P<0.05),而三组外泌体中均未检出Histone蛋白。外泌体呈形态均一的类圆形,表面有完整的双层模型结构,大多数外泌体颗粒的粒径集中在154 nm左右。结论成功从缺氧干预巨噬细胞的细胞培养上清液中分离提取出外泌体,通过检测其特异性标志蛋白及形态学分析显示提取的外泌体含量及纯度较高。