巨噬细胞来源外泌体的提取与鉴定

摘要

目的:提取和鉴定巨噬细胞来源的外泌体,为后续开展外泌体相关的研究建立稳定的提取方法,并为当前外泌体的提取方法提供一定参考。方法:使用超速离心结合过滤法提取鼠源巨噬细胞培养上清液中的外泌体;通过马尔文粒度分析仪测定其粒径大小和电位,透射电镜观察其形态特征,BCA试剂盒测定外泌体的含量,同时用Western Blot技术验证外泌体的特征蛋白CD9和CD63的表达。结果:从鼠源巨噬细胞培养上清液中分离出的外泌体,马尔文粒度分析显示粒径大小为(97.3±5.73)nm,Zeta电位为-21.26±1.72。透射电镜下观察可见茶托样、均质、具有膜样结构的微小囊泡,直径约100 nm;20 mL培养基能分离出约64μg外泌体,Western Blot实验结果显示特征蛋白分子CD9和CD63在外泌体提取物中表达丰度高,而在提取后的细胞上清液中没有检测到表达。结论:本研究利用超速离心结合过滤法成功分离了鼠源巨噬细胞来源的外泌体,其形态均匀,提取含量及纯度较高。