不吸水链霉菌梧州新亚种基因组文库的构建

摘要

以不吸水链霉菌梧州新亚种为材料,提取的总基因组DNA经Sau3AI不完全酶切,回收 20～30 kb DNA酶切片段,与经HpaI和BamHI酶切的粘粒载体pKC505进行连接,将连接产物用噬菌体包装蛋白包装,侵染大肠埃希菌DH5α.在含有安普霉素的LB平板上培养,所得转化子数为 12 000 个,构建成不吸水链霉菌梧州新亚种的基因组文库.以不吸水链霉菌染色体基因组大小为 7 Mb计算,概括了不吸水链霉菌梧州新亚种约99%的基因组,达到了建库要求的理论值.未扩增文库的滴度为1.2×108 pfu/L,扩增文库的滴度为4.8×1011 pfu/L,包装效率为每微克DNA 1.2×105个转化子.随机挑取菌落,提取重组质粒进行酶切电泳分析,均有外源片段插入.基因文库的构建为进一步深入研究梧宁霉素生物合成基因结构及功能奠定基础.