人乳房珠蛋白外周血表达RT-PCR检测及乳腺癌诊治应用

摘要

目的建立灵敏外周血人乳房珠蛋白(hMAM)表达RT-PCR检测方法,探索hMAM在乳腺癌诊治中的应用价值.方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL液提取总RNA,作RT-PCR,并查β-actin监控;确认的cDNA先作普通PCR扩增,再作荧光定量PCR扩增.结果64例标本有63例确认转录为cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例.经普通PCR后再作荧光定量PCR,乳腺癌hMAM表达阳性率为53.3%,与良性乳腺肿瘤和正常对照间阳性率有显著差异(P＜0.05);而不作普通PCR的cDNA直接行荧光定量PCR,结果无阳性.淋巴结转移较未转移,hMAM表达阳性率有极显著差异(P＜0.01).结论外周血hMAM表达是乳腺癌细胞微转移的特异指标;单次PCR法的灵敏度不够,二次PCR可明显提高灵敏度,并一次普通PCR加一次荧光定量PCR的组合效果更理想.外周血hMAM表达可能是监测淋巴结转移较好指标.