一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立

摘要

目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法.方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DNA片段长度的DNA回收率.结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5～2.0 mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30 min前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30 min回收率达85%,再增加冻融时问回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1 h;在5 000 r·min-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至5 000 r·min-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过10 000 r·min-1 (约合10 000 g);以10 000 r·min-1离心,30 min前,离心时间对回收率影响较大,至30 min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加;250～2 000 bp长度DNA片段,回收率为80.7%～88.4%,即使100 bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性.结论:硅化晴纶纱厚度0.5～2.0 mm,冻融时间≥1 h,离心力≥10 000 g,离心时间30 min DNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段.