Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达

摘要

目的:构建pcDNA3.lmyc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒,证实融合蛋白在细胞内表达.方法:以pcDNA3.1-Smad2/3和pGEX2T-Smad4质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Smad2/3/4全长编码基因,亚克隆至含有pcDNA3.1 myc-HisA标签的真核表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blotting检测.结果:Smad2/3/4全长基因序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1myc-HisA中,酶切鉴定片段为1 401、1 275和1 656 bp.Western blotting检测到融合蛋白pcDNA3.1myc-HisA- Smad2/3/4的表达.结论:成功构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒,同时鉴定其融合蛋白的表达.