沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌TSCCA细胞模型的建立

摘要

目的:设计并构建α-catulin-shRNA表达载体,建立沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌(TSCC),TSCCA细胞模型并观察其沉默效率,为TSCC的基因治疗提供依据.方法:TSCCA细胞分为转染组(转染sh-catu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4质粒)、阴性对照组(转染sh-nc质粒)及空白对照组(未处理).根据GenBank上获取的α-catulin mRNA序列,设计并合成4条α-catulin-shRNA质粒表达载体.测序鉴定后,经脂质体介导,将3组质粒分别转染至体外培养的人TSCCA细胞中,荧光显微镜观察各组TSCCA细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;采用RT-PCR和Western blotting法检测TSCCA细胞中α-catulin基因的mRNA及其蛋白相对表达水平及沉默效率.结果:测序鉴定表明成功构建了编码α-catulin的shRNA质粒表达载体sh-catu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4;转染TSCCA细胞后,荧光显微镜下观察到表达载体在细胞中成功表达.RT-PCR检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA相对表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05).Western blotting法检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05).结论:成功构建α-catulin-shRNA重组质粒载体,建立了沉默α-catulin基因的人TSCC的TSCCA细胞模型,为研究α-catulin基因在TSCC发病机制中的作用提供了细胞模型.