6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

摘要

为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA.采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定.用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d,4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清.间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性.结果显示,6-B A人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1:51200以上,2号小鼠血清效价最高为1:204800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26～701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01％.综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体.