河北省马铃薯Y病毒株系分子鉴定及其RT-PCR检测

摘要

根据马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PVY的马铃薯田间病叶组织中提取出病毒的RNA, 进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约800 bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的基因片段大小一致,本试验建立了快速、灵敏、简便的PVY检测的方法.将RT-PCR扩增产物克隆到质粒pGEM-T上,并进行了序列分析.结果表明,克隆的cDNA片段由801个核苷酸组成,编码267个氨基酸组成的理论分子量为29 kD蛋白,与PVY外壳蛋白的大小一致,与基因库登记的代表性株系相比,它们之间的核苷酸序列同源性为89.6%～98.8%,氨基酸序列的同源性为93.3%～98.5%,说明PVY CP基因具有高度的保守性(记为PVY-HBEI),与国内报道的PVY-CHU、PVY-ZHJ和PVY-ZHOU株系的氨基酸序列同源性分别为96.6%、98.5%和97.8%,与PVYN和PVYO株系的氨基酸序列同源性分别为93.6%和97.8%,从分子水平上确定PVY-HBEI归属于普通株系(PVYO株系).