基于5-甲基胞嘧啶抗体的DNA甲基化电化学检测

摘要

目的:构建一种基于5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体的电化学生物传感器,用于DNA多甲基化位点的定量分析。方法:采用纳米金修饰金电极(AuNPs/Au),以自组装方式依次将单链DNA(ssDNA)、巯基己醇(MCH)和靶DNA连接到AuNPs/Au上制备DNA电化学传感器,经过电化学表征检测电极修饰效果;再以5-mC抗体特异性识别靶DNA中的甲基化位点,并以辣根过氧化物酶标记二抗(HRP-IgG)为信号示踪物,优化杂交时间及抗5-mC抗体浓度;采用差分脉冲伏安法(DPV)分别检测非甲基化与不同数量甲基化DNA的电化学信号,同时考察该方法的重复性与稳定性。结果:电化学表征结果表明电极修饰成功,优化实验条件结果显示最优杂交时间为90 min、最佳抗体浓度为10 mg/L,在该条件下DNA电化学传感器能有效区分甲基化与非甲基化DNA,并且DPV峰电流的大小与DNA甲基化位点的数量呈线性关系,具有较好的重复性与稳定性。结论:制备的DNA电化学传感器能对多个位点的DNA甲基化定量检测,有望成为临床DNA甲基化位点定量检测的有效手段。