实时荧光环介导等温扩增技术检测婴儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌的研究

摘要

目的 建立实时荧光环介导等温扩增法(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测阪崎克罗诺杆菌.方法 以阪崎克罗诺杆菌(基因号AY702093)16S～23S rRNA的保守序列进行引物设计,对dNTPs、Mg2+及模板浓度等反应条件进行优化,并考察该方法的特异性和灵敏度.结果 实时荧光LAMP法检测的最佳反应体系为:内引物1.6μL FIP和1.6μL BIP,外引物:0.5 μL F3和0.5 tL B3,2.5 tL2.5mmol/L dNTP,2 μL4 mmol/L MgSO4,3μL Buffer,1.6 μL 10×Bst DNA聚合酶,3μL DNA模板,0.5 μL 100×荧光染料,用灭菌双蒸水补足25 μL体系,在63℃下反应60 min.除阪崎克罗诺杆菌之外其他菌株均没有产生特异性荧光扩增曲线.实时荧光LAMP检测克罗诺杆菌的灵敏度可达到8×10-2 CFU/mL.结论 本方法检测克罗诺杆菌具有耗时短、特异性强及灵敏度高等优点,可为快速检测婴儿配方奶粉中的克罗诺杆菌提供参考.