基于实时荧光环介导等温扩增检测鸡肉中大肠杆菌O157∶H7方法的研究

摘要

本研究以大肠杆菌O157∶H7的VT2基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立了鸡肉中大肠杆菌O157∶H7实时荧光定量环介导等温扩增(Rti-LAMP)检测方法.纯培养大肠杆菌O157∶H7检测灵敏度达3.5CFU/反应,需时45min.模拟大肠杆菌O157∶H7污染鸡肉样品,经37°C预增菌4h,用Whirl-pak无菌袋过滤离心得沉淀,提取样品DNA模板用于Rti-LAMP反应,检测大肠杆菌O157∶H7灵敏度可达140CFU/g,整个检测流程约7h.进一步采用蒙脱石封闭的活性炭前处理污染鸡肉样品,不经预增菌过程,结果表明该Rti-LAMP检测方法灵敏度达12CFU/g,整个检测耗时约4.5h.从市场购买鸡肉样品51份,以大肠杆菌国标检测法为对照,研究基于Rti-LAMP联合预增菌或者封闭活性炭预处理但不经预增菌的两种方法,对比检测临床鸡肉样品大肠杆菌O157∶H7污染率.结果:国标法和预增菌的Rti-LAMP两种方法均检测到同一份鸡肉样品为大肠杆菌O157∶H7阳性,而经封闭活性炭预处理但未经预增菌的Rti-LAMP则检测到8份鸡肉样品大肠杆菌O157∶H7阳性.研究表明,封闭活性炭预处理的Rti-LAMP检测方法,较国标法更灵敏、快速、简便、特异地检测鸡肉中大肠杆菌O157∶H7污染.