猪瘟病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

摘要

根据GenBank已发表的HCV 5'NTR核苷酸序列设计一对特异性引物,扩增位置在整个基因的221～377位,片段长度为167 bo.提取由厦门出入境检验检疫局技术中心动物实验室保存的HCV细胞毒的RNA,并反转录成cDNA,以此cDNA为模板建立了SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测猪瘟病毒的方法,并用该方法检测送检的临床疑似病料.结果表明:本研究建立的HCV-SYBR Green Ⅰ PCR特异性强,与FMDV、PCV2、PRRSV、PPV、PRV等常见猪病毒病病原没有交叉反应;灵敏度高,可以检测到5.3X 102的病毒拷贝数;操作简单,耗时短,只需3 h即可完成整个试验过程,可初步用于临床检测.