猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

摘要

本文根据Genbank以发表的HCV 5’NTR核苷酸序列设计一对特异性引物，扩增位置在整个基因的221-377位，片段长度为167bp。提取本实验室保存的HCV细胞毒的RNA，并反转录成cDNA，以此cDNA为模板建立了SYBR Green I实时定量PCR检测猪瘟病毒的方法。并用该方法检测送检的临床疑似病料，结果表明，本研究建立的HCV-SYBR Green I PCR特异性强，与FMDV、PCV2、PRRsV、PPV、PRV等常见猪病毒病病原没有交叉反应；灵敏度高，可以检测到5.3×102的病毒拷贝数；操作简单，耗时短，只需3小时i即可完成整个实验过程，可初步用于临床检测。