血红素加氧酶-1降低RAW264.7巨噬细胞炎症因子表达的线粒体机制研究

摘要

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)抑制RAW264.7巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、活性氧(ROS)合成的线粒体机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,将其随机分为空白对照组(C组)、内毒素脂多糖(LPS)造模组(CL组)、血红素(Hemin,HO-1诱导剂)+LPS组(HL组)、锌原卟啉-IX(ZnPP-IX,HO-1拮抗剂)+LPS组(ZL组)、3-甲基腺嘌呤(3-MA,线粒体自噬抑制剂)+LPS组(ML组)、雷帕霉素(RAPA,线粒体自噬促进剂)+LPS组(RL组)共6组。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测HO-1、TNF-α、IL-1β、微管相关蛋白1A/1B轻链3B(LC3B)、受体裂变蛋白1(FIS1)、线粒体动力蛋白1(DRP1)相对表达量,并使用ROS检测试剂盒检测ROS含量。结果与C组比较,另5组的HO-1、LC3B、ROS表达量均增加,DRP1表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,CL组、ZL组和ML组的FIS1表达量均增加,HL组、RL组的FIS1表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,HL组的IL-1β、TNF-α表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与CL组比较,HL组的LC3B表达量降低,ZL组、ML组和RL组的LC3B表达量均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与CL组比较,HL组的TNF-α、IL-1β表达量均降低,RL组的IL-1β表达量增加,TNF-α表达量降低,ML组的TNF-α、IL-1β表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与CL组比较,HL组、RL组的ROS表达量降低,ZL组、ML组的ROS表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。HL组的TNF-α、IL-1β、DRP1表达量低于另5组,HO-1表达量高于另5组,差异有统计学意义(P<0.05);RL组的FIS1表达量低于HL组,LC3B表达量高于HL组,差异有统计学意义(P<0.05)。RL组的IL-1β、TNF-α、FIS1、DRP1、ROS表达量低于ML组,LC3B表达量高于ML组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HO-1可抑制RAW264.7巨噬细胞线粒体分裂而降低炎症因子表达,且效果优于线粒体自噬。