鹅掌楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化

摘要

为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增ISSR的PCR优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组DNA为材料,系统地测试了模板DNA、引物、dNTPs、Me+浓度、Taq DNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响.结果表明:优化的PCR反应体系为:20μL总体系中,含30ng模板DNA,0.3 μmol·L-1随机引物,0.2mmol·L-1 dNTPs,1.4 mmol·L-1 Mg2+,0.8 U Taq DNA聚合酶;最佳退火温度为60℃;PCR反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,60℃退火45s,72℃延伸2min;45个循环;72℃再延伸7min.