栓菌420漆酶同工酶B基因克隆及异源表达

摘要

根据铜结合区的保守氨基酸序列设计简并引物,扩增栓菌420(Trametes sp.420)基因组,结合长距离反向PCR(LD-IPCR)技术,克隆得到新型漆酶同工酶B基因(lacB),包括结构基因(2255bp)及5'-和3'-非编码序列.lacB含12个内含子,其cDNA序列长1560bp,编码495aa成熟多肽和24aa信号肽.lacB与其它不同来源的真菌漆酶基因具有较高的同源性,而与植物、细菌、昆虫的漆酶基因同源性低于25%.将不含信号序列的lacB cDNA通过质粒pPIC9克隆到表达载体pPIC9K上,电击转化毕赤酵母GS115细胞,经BMM-ABTS平板筛选得到漆酶分泌阳性转化子.