复合诱变和原生质体融合选育S-腺苷甲硫氨酸酿酒酵母高产菌株

摘要

对生产S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的酿酒酵母(S.cerevisiae)菌株R1进行复合诱变和原生质体融合。采用酶解法获得出发菌株S.cerevisiae R1的单倍体菌株hR10,对其进行UV和DES复合诱变,筛选出了4个单倍体正突变株DR1-3、NM14、NM39和NM45。制备了单倍体正突变株的原生质体,采用热灭活和UV灭活法灭活双亲原生质体,在聚乙二醇(PEG)的诱导下进行原生质体融合,筛选得到融合子F35,其生产SAM的产量为22.5 mg/L,与出发菌株R1(11.1mg/L)相比,提高了103%,并且能够稳定遗传。采用正交试验优化了F35发酵生产SAM的培养基和发酵时间,优化了的培养基配方为麦芽糖100 g/L,蛋白胨10 g/L,NH4H2PO4 4 g/L,NH4Cl 5 g/L,MgSO4 0.1 g/L,KH2 PO4 6 g/L,发酵时间为72 h。