白木香基因组DNA的提取及ISSR反应条件的优化

摘要

[目的]以白木香为试验材料,研究基因组DNA提取方法,并优化ISSR-PCR反应体系.[方法]利用快速提取仪和微量液氮法提取DNA,并对ISSR-PCR反应体系进行单因素筛选.[结果]微量液氮法提取的DNA质量好于快速提取仪,但2种方法得到的DNA对后续ISSR研究没有明显的差异.同时,建立了最适的白木香ISSR-PCR体系,即25μPCR反应体积中,1×PCR buffer,2.0mmol/L MgCl2,4ng/μl,模板 DNA,200 μmol/L dNTPs,1.1 U Taq DNA聚合酶,0.4μmol/L引物.最佳扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行45个循环,94℃变性45s,复性温度根据各引物的TM值略低1～2℃,45 s,72 ℃延伸75 s,循环结束后72℃延伸7 min.[结论]优化系统的建立为进一步利用ISSR分子标记技术进行白木香遗传多样性研究提供了基础.