DNA提取

摘要： 以张掖龙渠青海云杉(Picea crassifolia)无性系种子园中的106个青海云杉亲本无性系为研究材料,采用改良CTAB法,提取的青海云杉基因组DNA,构建SLAF文库并进行高通量测序,之后分析SLAF测序数据和筛选SNP位点,基于邻接法分析得到样品的聚类情况。研究得出:将测序的水稻日本晴reads与其参考基因组进行比对,显示本试验双端比对效率为95.33%,说明SLAF建库成功。本研究中所测序列的Q30较高,碱基测序错误率低,测序质量高;本研究共开发4058883个SLAF标签,标签的平均测序深度为21.21×。共开发12275765个青海云杉SNP标记,各青海云杉样本的SNP数量为1890934~4487841。利用已开发的高质量青海云杉SNP标记,构建了106个青海云杉的系统发育树,发现来自不同种源的青海云杉在各组中分布比较均匀,不同种源的青海云杉多聚为一类。通过SNP标记和主成分分析,这些无性系来源于同一个祖先的可能性较大,表明无性系间亲缘关系相近。为今后遗传多样性的分析、遗传图谱的构建等提供了基础数据,也为青海云杉初级种子园去劣疏伐提供依据,为高世代种子园的营建奠定基础。

摘要： 目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier 5.0软件设计可扩增不同大小DNA片段且无交叉反应的物种特异性引物,特异性扩增后,将扩增条带克隆后测序,与GenBank数据库已登记序列比对。建立并优化多重PCR,评价其特异性和灵敏度,并采用该方法鉴别27份模拟混合掺假样品。结果:建立的猪、牛和熊胆粉DNA提取方法可于2 h之内完成操作,DNA纯度分别为2.04、1.69和1.70,浓度分别为158.63、189.34和148.55 mg·L^(-1)。设计可扩增出猪、牛和熊的物种特异性引物。测序结果与GenBank数据库已登记序列同源性达99%以上。PCR体系各物种引物特异性强,无非特异扩增。应用于三重PCR体系中的引物互不干扰,检测灵敏度高,3种靶标样品任意一种DNA浓度降至1 mg·L^(-1)时均可成功检测。27份人工模拟熊胆粉不同物种及不同比例掺假样品的检测结果与预设混合情况相符,盲法随机抽样重复检测5次,结果稳定。结论:成功建立可通过一次实验同时鉴别猪、牛和熊胆粉的方法,具有简便、灵敏及高效的特点,可应用于熊胆粉及其常见动物源性掺伪的鉴别。

摘要： 分析教材中"DNA的粗提取与鉴定"实验存在的不足,探索如何在山区县域学校,用新的实验材料和方法提高实验效率,缩短实验时间,从而达到良好的实验效果,提高学生的参与度,帮助学生深刻理解相关生物学知识.

摘要： 获得高质量的微生物基因组DNA是进行复杂微生物群落宏基因组学研究的基础和难点。植物叶表是一个微生物多样性丰富的复杂生态系统,这些微生物群落可以调节叶片功能性状,影响植物的适应性。深入了解叶表微生物群落的基本结构和功能原理,有助于在促进植物生长和植物保护方面发挥重要的应用价值。由于叶表严苛的环境,导致富集叶表微生物难度较大,严重限制了高质量叶表微生物基因组DNA的提取。基于现有DNA提取方法,加入表面活性剂Silwet L-77进行前处理,同时循环利用洗脱液,加强叶表微生物的富集,以提高叶表微生物的获取量。结合商业试剂盒方法进行提取得到高纯度、高浓度的基因组DNA。经过质量控制和建库测序验证,DNA质量达到宏基组建库的要求。通过此方法可以提高叶表微生物分离和收集效率的方法,提高叶表微生物DNA提取成功率,为应用高通量测序技术研究叶表微生物组成和其他植物分子生物学研究提供参考。

摘要： 目的检验玻璃珠-涡旋振荡改良法提升硅藻DNA提取的效果。方法以DNeasyPowerSoilPro试剂盒为对照,另选取2种不同原理的植物DNA提取试剂盒(新型植物基因组DNA提取试剂盒、PlantDNA Isolation试剂盒)和1种血液DNA提取试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒)对同一水样及同一溺死案件肺组织的硅藻DNA进行提取。设计不同大小玻璃珠质量比和涡旋振荡时间的组合,选择加入玻璃珠振荡的最佳DNA提取条件。将常规组与改良组的提取产物直接进行电泳,经硅藻特异性PCR扩增检测,采用qPCR对提取物进行定量,对各组的Ct值进行统计学分析。结果当涡旋振荡频率为3000r/min时,DNA提取的最佳组合为涡旋振荡4 min,大小玻璃珠质量比为1∶1。以DNeasyPowerSoilPro试剂盒的Ct值为参照,10 mL水样的Ct值大于0.5g组织的Ct值。其他3种试剂盒采用玻璃珠-涡旋振荡改良法后,用于植物DNA提取的2种试剂盒Ct值均下降,且改良前后组织的Ct值差异均有统计学意义(P<0.05);全血基因组DNA提取试剂盒可以成功提取硅藻DNA,水样提取效果接近DNeasyPowerSoilPro试剂盒,改良法用于组织样本后,其Ct值差异有统计学意义(P<0.05);但应用3种试剂盒对水样中硅藻DNA进行提取时,改良前后的Ct值只有新型植物基因组DNA提取试剂盒差异具有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃珠-涡旋振荡改良法可提高植物及血液DNA提取试剂盒对法医学检材中硅藻DNA的提取效果,特别是对组织样本中硅藻DNA的提取。

摘要： 近年来基于培养和非培养方法研究油藏微生物的报道已经不少,但鲜有基因组总DNA提取技术与微生物检出性的报道。文章通过对长庆油田Q2YG138140油井采出液进行现场分类分级处理,将原样本即时分为油相及水相(分成4种孔径(10.00,1.00,0.22,0.10μm)膜滤)作为研究对象,结合自主原油基因组总DNA提取技术对该油井采出液样本进行菌群分析。结果表明:油相样本共检出11门、25纲、43目、66科和78属,水相样本共检出17门、35纲、64目、105科和150属。该自主提取方法对油藏常见多种菌门及菌属基因组DNA的提取均具有较好的适用性。油相中,检出11属为“其它”,相对丰度10.02%;水相中,检出26属为“其它”,相对丰度17.34%,6属为未分类,相对丰度0.40%,该方法针对未知微生物和生物量相对较低的极端环境微生物仍均具有一定的检出能力。4种滤膜(10.00,1.00,0.22,0.10μm)分别检出10门、8门、10门和13门,59属、65属、79属和82属。0.10μm滤膜检出的菌群多样性明显多,进一步表明该自主提取方法适用于油水微生物的多样性分析。

摘要： 甲醛溶液浸泡的人类组织样本很多情况下是可遇不可求的珍贵资源,而其DNA的提取是一大难题。本文分别使用改进的甲醛溶液浸泡样本基因组DNA提取方法以及通用型基因组DNA提取试剂盒,对四份不同时间固定的福尔马林浸泡的人类胚胎皮肤和肌肉的样本进行基因组DNA提取。使用紫外分光光度计鉴定所提取DNA的纯度和质量浓度,DNA溶液点样进行琼脂糖凝胶电泳及成像,结果显示,改进的提取方法所得基因组DNA的质量浓度和纯度均优于通用型基因组DNA提取方法。以提取所得的基因组DNA模板进行PCR扩增,电泳结果显示,改进的提取方法所提取的基因组DNA有更好的PCR扩增效果。本研究为甲醛溶液浸泡的珍贵样本的基因组DNA的提取提供了方法指导和改进方向的参考。

摘要： 为获得一种能高效稳定提取玉林大蒜基因组DNA的方法,以便于进行其分子生物学鉴定,本研究使用十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、尿素法、试剂盒法和高盐低p H法对大蒜鳞茎进行DNA提取,通过纯度和浓度、琼脂糖凝胶电泳检测,来判断不同方法所提取的大蒜DNA的质量。结果表明:用尿素法提取可以有效除去大蒜中多酚类和多糖类等物质的干扰,提取大蒜的DNA浓度高,效果理想。

摘要： 建立一种恒温隔绝式聚合酶链式反应(insulated isothermal polymerase chain reaction,iiPCR)检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。根据nuc基因设计特异性引物、探针,并探索针对食品样品快速提取金黄色葡萄球菌模板DNA的方法;通过优化引物、探针及模板的用量,对iiPCR的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,并利用该方法和传统PCR方法对人工污染样品和实际采集食品样品中的金黄色葡萄球菌进行检测和比较。结果表明:水浴法因操作简便、耗时短、仪器要求不高,适合快速提取模板DNA;建立的iiPCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好的特点,且与其他菌无交叉反应;对人工污染猪肉样品和牛奶样品中的金黄色葡萄球菌,iiPCR方法可在培养至第6小时完成检测,检出限为10^(3) CFU/mL和10^(2) CFU/mL,传统PCR方法8 h后完成检测,检出限为10^(5) CFU/mL;针对实际采集的食物样品,验证实验表明iiPCR方法在培养至第6小时的检出结果与传统PCR在培养至第12小时以及传统培养方法培养至第16小时的检出结果一致。证明建立的iiPCR方法能够更快速准确检测食品中金黄色葡萄球菌。

摘要： 饲料样本本身的复杂性给进出口产品转基因(genetically modified,GM)成分的检测工作带来了巨大的压力和挑战。玉米蛋白粉主要包含蛋白质、淀粉和脂类等成分,从中提取高品质的DNA比较困难,而高品质的DNA是转基因检测研究的关键,能够大大降低进出口检验中的“假阴性”结果。采用市售主流品牌常用的7种试剂盒(Promega公司、Biotecon公司、天根生化科技有限公司、Invitrogen公司、Qiagen公司、TaKaRa公司)、CTAB法以及改良SDS-CTAB法提取玉米蛋白粉中的DNA。通过对玉米内源基因进行实时荧光PCR检测,发现改良SDS-CTAB法提取的玉米蛋白粉DNA质量明显优于其他方法,改良SDS-CTAB法内源基因zSSⅡb的Ct值为28.14,较CTAB法提高了27%。研究建立的改良SDS-CTAB法在国内外尚属首次应用于饲料转基因产品中,并对7批次实验室送检样品进行转基因成分检测,成功检出2批次阳性样品。

摘要： 为建立一种满足车厢复杂现场条件的臭虫微量DNA有效提取方法,本研究采用离心柱法、磁珠法及其改良方法提取臭虫总DNA,利用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量.结果显示离心柱法和磁珠法均可有效提取臭虫基因组DNA,磁珠法提取的DNA纯度显著高于离心柱法.改良后的提取方法,裂解时间30min与2h的DNA提取浓度和纯度间没有显著差异;上清中的DNA占总提取量的70％以上;添加沉降剂可显著提高电泳条带亮度.综上所述,改良的臭虫基因组DNA提取方法简单快速,能够满足后续臭虫PCR检测的需要.

摘要： 为建立一种满足车厢复杂现场条件的臭虫微量DNA有效提取方法,本研究采用离心柱法、磁珠法及其改良方法提取臭虫总DNA,利用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量.结果显示离心柱法和磁珠法均可有效提取臭虫基因组DNA,磁珠法提取的DNA纯度显著高于离心柱法.改良后的提取方法,裂解时间30min与2h的DNA提取浓度和纯度间没有显著差异;上清中的DNA占总提取量的70％以上;添加沉降剂可显著提高电泳条带亮度.综上所述,改良的臭虫基因组DNA提取方法简单快速,能够满足后续臭虫PCR检测的需要.

摘要： 为建立一种满足车厢复杂现场条件的臭虫微量DNA有效提取方法,本研究采用离心柱法、磁珠法及其改良方法提取臭虫总DNA,利用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量.结果显示离心柱法和磁珠法均可有效提取臭虫基因组DNA,磁珠法提取的DNA纯度显著高于离心柱法.改良后的提取方法,裂解时间30min与2h的DNA提取浓度和纯度间没有显著差异;上清中的DNA占总提取量的70％以上;添加沉降剂可显著提高电泳条带亮度.综上所述,改良的臭虫基因组DNA提取方法简单快速,能够满足后续臭虫PCR检测的需要.

摘要： 为建立一种满足车厢复杂现场条件的臭虫微量DNA有效提取方法,本研究采用离心柱法、磁珠法及其改良方法提取臭虫总DNA,利用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量.结果显示离心柱法和磁珠法均可有效提取臭虫基因组DNA,磁珠法提取的DNA纯度显著高于离心柱法.改良后的提取方法,裂解时间30min与2h的DNA提取浓度和纯度间没有显著差异;上清中的DNA占总提取量的70％以上;添加沉降剂可显著提高电泳条带亮度.综上所述,改良的臭虫基因组DNA提取方法简单快速,能够满足后续臭虫PCR检测的需要.

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 此案中，浸泡后烟蒂的成功检出为本案侦破提供了方向。面对送检时已经浸泡2小时以上的烟蒂，采用纯化的方式提高检验成功率成为关键，因此在提取时采取了疑难检材提取和纯化的方法。同样，为得到更多的扩增产物，扩增中，增加了DNA样本加入量。无论是提取或是扩增均未按照常规烟蒂在检验时所采取的提取和扩增模式。面对此类特殊检材，实验人员应在实验开始前对于送检的检材有客观的判断，制定合理的检验方案，最大限度提高检验成功率。

摘要： 昆虫基因组DNA提取是对昆虫在分子水平上进行研究的关键,提取的DNA的纯度、浓度及完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件.本研究以不同变态时期及组织的柞蚕为样品进行DNA的提取,并对结果进行对比分析.结果发现,利用蚁蚕为样品提取过程简单,DNA质量好,得率高.利用血细胞为样品操作简单、时间短、效率高,但DNA得率不高.

摘要： 昆虫基因组DNA提取是对昆虫在分子水平上进行研究的关键,提取的DNA的纯度、浓度及完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件.本研究以不同变态时期及组织的柞蚕为样品进行DNA的提取,并对结果进行对比分析.结果发现,利用蚁蚕为样品提取过程简单,DNA质量好,得率高.利用血细胞为样品操作简单、时间短、效率高,但DNA得率不高.

摘要： 本发明涉及一种DNA提取试剂、DNA的提取方法及DNA提取试剂盒。该DNA提取试剂包括裂解液及除杂剂，裂解液包括终浓度为1M～5M的异硫氰酸胍、终浓度为0.01M～0.2M的Tris‑HCl和最终质量体积百分数为1％～10％的N‑月桂酰肌氨酸；除杂剂包括交联聚乙烯基吡咯烷酮及聚乙烯基吡咯烷酮中的至少一种。上述DNA提取试剂中的裂解液与除杂剂能够相互配合，能够减少DNA在提取制备过程中的降解，且提高DNA的纯度，使用上述DNA提取试剂制备得到的DNA能够满足宏基因组测序的要求。

摘要： 本发明公开了一种用于游离循环肿瘤DNA提取的增强剂、提取外周血中游离循环肿瘤DNA的试剂盒及方法。其中，该增强剂包括：1μg/μL～5μg/μL Carrier RNA、1μg/μL～5μg/μL多聚腺苷酸、1μg/μL～5μg/μL糖原、0～5μg/μL线性丙烯酰胺、1μg/μL～5μg/μL酵母tRNA、2μg/μL～10μg/μL大马哈鱼精子DNA和/或鲱鱼精子DNA和水。本发明的用于游离循环肿瘤DNA(ctDNA)提取的增强剂，可与常规的裂解结合液、洗涤缓冲液、洗脱液等结合使用，通过特异性的结合ctDNA并沉降下来，显著地提高了ctDNA的提取效率和提取产量。

摘要： 本发明公开了一种快速、高质量、通用型基因组DNA提取试剂盒及DNA提取方法。本发明用于提取DNA的试剂盒包括溶液A：1‑6%的CTAB、1‑6M的盐酸胍、50‑250mM的pH为8.0的Tris‑HCl、8‑50mM的pH为8.0的EDTA、0.2‑3.0M的NaCl、0.4‑3％的Triton X‑100;溶液B：10‑100mM的NaCl、3‑50mM的pH为8.0的Tris‑HCl、70%‑80%的乙醇；溶液C：TE缓冲液，pH8.0。本发明可以高效提取得到不同类型样品的纯度高且完整性好的DNA。

摘要： 本发明涉及一种DNA提取试剂、DNA的提取方法及DNA提取试剂盒。该DNA提取试剂包括裂解液及除杂剂，裂解液包括终浓度为1M～5M的异硫氰酸胍、终浓度为0.01M～0.2M的Tris‑HCl和最终质量体积百分数为1％～10％的N‑月桂酰肌氨酸；除杂剂包括交联聚乙烯基吡咯烷酮及聚乙烯基吡咯烷酮中的至少一种。上述DNA提取试剂中的裂解液与除杂剂能够相互配合，能够减少DNA在提取制备过程中的降解，且提高DNA的纯度，使用上述DNA提取试剂制备得到的DNA能够满足宏基因组测序的要求。

摘要： 本发明提供了琼脂糖在DNA提取中的应用,在DNA提取过程中加入琼脂糖。进一步的，本发明还提供了相应的DNA提取试剂盒及DNA提取方法，DNA提取试剂盒包括盒体及盒体中单独存放的试剂，所述试剂包括琼脂糖。所述DNA提取方法，包括在DNA提取过程中加入琼脂糖的步骤。本发明通过实验证明了在DNA提取过程中加入琼脂糖，可提高微量DNA在提取过程中的回收率，获得良好PCR扩增效果及完整的STR分型结果，本发明提供的DNA提取方法相比于常规提取方法，如Chelex-100法、磁珠法，具有更高的DNA回收率。

摘要： 本发明涉及一种快速高效提取烟草基因组DNA的方法，具体为：使用以下提取液对DNA进行提取，提取液的各组分的浓度为0.1MTris、1M KCl、10mM EDTANa

摘要： 本发明提供了一种磁珠法提取质粒DNA的试剂盒，包括质粒提取试剂和羟基磁珠，质粒提取试剂包括溶液I、溶液II、溶液III、磁珠结合液、漂洗液和洗脱液。溶液I、溶液II、溶液III的混合比例为1：1：1.4。还提供了利用上述磁珠法提取质粒DNA的试剂盒来提取高纯度质粒DNA的方法。本发明所述的磁珠法提取质粒DNA的试剂盒及提取质粒DNA的方法，缩短了质粒提取时间，提取的质粒能够满足后续PCR、酶切、转化和转染等实验的大量需求，减少了时间和经济成本。

摘要： 本发明公开了一种低共熔溶剂在DNA提取中的应用，所述低共熔溶剂为氯化胆碱体系低共熔溶剂，尤其是氯化胆碱与氢键供体摩尔比为1:1～5，所述氢键供体包括六氟异丙醇；本发明还公开了一种低共熔试剂提取DNA的方法，采用所述的氯化胆碱体系低共熔溶剂提取全血中DNA，本方法对DNA提取回收率可达95％以上，且提取的DNA浓度在50μg/mL以上，本方法一次性提取获得DNA样本量大，而且高效、安全环保，能够满足大批量实验需求，另外，本发明还公开了一种DNA提取试剂盒，所述DNA提取试剂盒，包括本发明所述的氯化胆碱体系低共熔溶剂。

摘要： 本发明公开了一种提取DNA的试剂盒，包括裂解液、萃取棒、清洗液、洗脱液；裂解液用于裂解生物样品；萃取棒用于萃取生物样品中的DNA，该萃取棒包括棒体、固定在棒体外壁上的复合膜，该复合膜包括硝酸纤维膜和粘附在硝酸纤维膜上的吸附材料M‑UIO‑66‑NH

摘要： 本发明公开了一种快速、高质量、通用型基因组DNA提取试剂盒及DNA提取方法。本发明用于提取DNA的试剂盒包括溶液A：1‑6%的CTAB、1‑6M的盐酸胍、50‑250mM的pH为8.0的Tris‑HCl、8‑50mM的pH为8.0的EDTA、0.2‑3.0M的NaCl、0.4‑3％的Triton X‑100;溶液B：10‑100mM的NaCl、3‑50mM的pH为8.0的Tris‑HCl、70%‑80%的乙醇；溶液C：TE缓冲液，pH8.0。本发明可以高效提取得到不同类型样品的纯度高且完整性好的DNA。