奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立

摘要

[目的]为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础.[方法]采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原,建立了检测奶牛孕酮含量的间接竞争ELISA方法.[结果]检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA的最佳反应条件确定为:最佳包被浓度为100 ng/ml,碳酸盐缓冲液的包被效果较好,以4 ℃过夜+37 ℃ 2 h佳,最佳封闭液为2%山羊血清,酶标抗体的工作浓度为0.13μg/ml.建立的标准曲线方程为 y= -1.844 4x -0.140 1(R2=0.981 7),检测范围为0～20 ng/ml,最低检测限为0.58 ng/ml.该标准曲线的批内变异系数和批间变异系数分别为2.22%和2.37%.[结论]该研究建立了定量检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA方法.