黄粉甲抗冻蛋白基因afp72 cDNA的克隆和序列分析

摘要

[目的]为抗冻蛋白基因afp72的体外表达和生物学功能研究奠定基础.[方法]从黄粉甲脂肪体中提取总RNA,通过RT-PCR克隆抗冻蛋白基因afp72,并构建克隆重组质粒pUCm-T-afp72.经双酶切后,将其与表达载体pMAL-p2X连接并转化到大肠杆菌TBI,构建表达重组质粒pMAL-p2X-afp72.[结果]afp72cDNA长度为216 bp;afp72的测序序列与CenBank中编码84个氨基酸的黄粉甲斫afps序列的同源性为89.48%;afp72基因可能来自其他黄粉甲抗冻蛋白基因的突变或缺失;从蛋白水平上证实AFP72是一个抗冻蛋白,afp72是一个抗冻蛋白基因;表达重组质粒pMAL-p2X-afp72的构建是成功的.[结论]该研究为利用基因工程方法构建抗冻蛋白转基因植物提供了材料.