苏云金芽孢杆菌crylAcl5基因的克隆及原核表达

摘要

[目的]为了分析苏云金芽孢杆菌cryIAc15基因序列.[方法]以全长基因PCR产物的黏端定向克隆的方法,设计1对特异引物,分别引入Sal和Bam H I酶切位点.以Ly30质粒DNA为模板扩增crylAc全长基因,与表达载体pUCM-T相应的酶切产物连接,转化大肠杆菌,获得含有crylAc基因的重组质粒pUCLyIAc.[结果]crylAc基因编码区为3 564 bp,编码蛋白分子量为134 kD,含1 184个氨基酸,与cryiAc3同源性最高,该基因经诱导获得高效表达,SDS-PAGE电泳检测到明显的134kD蛋白带.[结论]诱导表达的cryIAc蛋白对棉铃虫、甜菜夜蛾等鳞翅目害虫幼虫均有较高的杀虫活性.