转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用

摘要

[目的]探讨转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用.[方法]将PCR扩增得到的人β-珠蛋白MAR插入到真核表达载体pCATG的下游,构建转基因表达盒3′端含MAR的表达载体.酶切鉴定正确后,转染CHO细胞,G418筛选出稳定转化的细胞株,ELISA分析转基因的表达水平,半定量PCR分析转基因相对拷贝数.[结果]结果表明,表达盒3′端含MAR序列能使转基因表达水平降低,其基因拷贝数则有一定程度的增加.转基因下游β-珠蛋白MAR在一定程度上能抑制外源基因的表达水平;外源基因表达量与基因拷贝数不成正比,未呈现出"拷贝数依赖性". [结论]该研究结果为进一步研究MAR的调控机制奠定基础.