人β-干扰素核基质附着区在CHO细胞中对转基因表达的调控

摘要

背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达。目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化E.coliJM109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.0650,pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。