蜡样芽孢杆菌M22锰超氧化物歧化酶基因在毕赤酵母中的表达

摘要

实验成功地构建了毕赤酵母(Pichia pastoris)表达质粒pPICZA-Mn-sod,质粒线性化后通过电激法导入毕赤酵母GS115,抗生素zeocin抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株.PCR鉴定及Mut+表型分析表明,目标基因已经重组到宿主基因组染色体上;0.5%甲醇诱导表达后,SDS-PAGE结果显示,表达蛋白的相对分子量约为23 kD,活性电泳出现明显活性条带;酶活性测定显示,重组菌株SOD活性比对照提高5倍左右;氯仿-乙醇(3:5/V:V)和KCN(5 mmol几)抑制反应进一步证明,所表达的SOD为锰超氧化物歧化酶C.来源于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)M22的Mn-sod基因在毕赤酵母中得到正确表达.为研究该酶的生理功能提供了必要的物质条件.