准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白的免疫检测和抗冻活性分析

摘要

利用克隆的新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲(Microdera punctipennis dzhungarica)抗冻蛋白基因MpAFP5的全长序列设计PCR引物,构建原核表达质粒pMALp2x-MpAFP5,以麦芽糖融合蛋白(MBP)方式在大肠杆菌(Escherichia coli)TB1中进行表达,经Amylose树脂亲和层析纯化获得了较高纯度的MBP-MpAFP5融合蛋白.Western blot结果证明,MBP-MpAFP5融合蛋白在大肠杆菌中得到特异性的正确表达.细菌抗冻实验结果表明,导入MpAFP5基因的大肠杆菌经诱导表达在低温处理时抗冻能力无显著提高,而外加纯化的MBP-MpAFP5融合抗冻蛋白对细菌有明显保护作用,并随浓度升高而保护作用增强.