阴沟肠杆菌UW4菌株ACC脱氨酶基因的克隆、序列分析及原核表达

摘要

从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株提取细菌总DNA,根据已报道的阴沟肠杆菌ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid deaminase)基因序列设计简并引物,通过PCR扩增获得1条约1.02 kb特异片段,把该片段连接到pGEM-Tvector上进行测序.序列分析结果表明,该基因编码区全长为1 017 bp,共编码338个氨基酸残基,与报道的序列相比仅存在8个核苷酸的差异,同源性达99.1%;将其翻译成氨基酸序列后发现,仅引起了4个氨基酸残基的变化,氨基酸同源性为98.2%.利用DNASIS软件对蛋白质二级结构进行分析比较,发现其蛋白质二级结构及其单元与报道的序列完全一致.将其插入原核表达载体pET-28b进行诱导表达,发现其表达蛋白在分子量约39 kD处比对照多出一明显条带;经Western blot分析检测,发现此带即为His-ACDS融合蛋白.