实时荧光定量PCR检测人apoM方法的构建

摘要

目的 建立检测人载脂蛋白M(apoM)的实时荧光定量PCR技术.方法 采用Primer Express Versions 2.0设计引物及TaqMan探针,检测apoM基因.将扩增的apoM基因片段纯化后与pMD19-T载体连接,克隆构建含apoM基因片段的重组质粒,作为定量检测apoM基因表达的标准品.结果 PCR扩增产物经测序分析证实为apoM特异性片段.本法灵敏度为40 copies/μl,线性范围为4.00×10~1～4.00×10~8copies/μl,相关系数为1.000,扩增效率E为90.5%,批间变异系数为6.38%～17.9%.结论 成功建立了检测人apoM的实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好,灵敏度高.