鸭肠炎病毒核衣壳蛋白质互作蛋白质基因荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为进一步阐明鸭肠炎病毒(DEV)的致病机理,本试验建立检测鸭肠炎病毒核衣壳蛋白质(NP)的互作蛋白质(PKCI)基因荧光定量PCR方法.针对PKCI基因设计特异性引物,经PCR扩增目的基因构建重组质粒pMD18-T-PKCI,将其作为阳性标准品构建荧光定量PCR标准曲线,并对建立的荧光定量PCR方法进行重复性、特异性和敏感性试验.结果显示:标准曲线的线性关系为Y=-3.31x+42.00,相关系数为-1.00,扩增效率为100％,熔解曲线仅出现单特异峰,对H5亚型、H7亚型和H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒、鸭肝炎病毒均未检测到荧光信号.表明本试验建立的方法具有良好的稳定性、特异性和灵敏性.