T7噬菌体穿孔素的克隆表达及对宿主损伤研究

摘要

为研究T7噬菌体穿孔素(Holin)蛋白对宿主细菌的增殖性能的影响,根据T7噬菌体gene 17.5设计引物,PCR扩增Holin基因和序列分析,将该基因插入原核表达载体构建重组表达菌BL-Holin.IPTG诱导Holin蛋白表达,SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白.分光光度法测定Holin蛋白对宿主细菌增殖性能的影响,扫描电镜观察重组菌诱导后表面结构的损伤情况.结果表明,成功扩增Holin基因,构建的重组菌能高效表达Holin蛋白.T7噬菌体Holin蛋白含有1个跨膜区,氨基端位于胞外、羧基端位于胞内.Holin蛋白的表达量随诱导时间延长而逐渐增加,细菌浓度从诱导0h至2h逐渐升高,2h后细菌浓度开始下降,直至6h,电镜观察发现诱导细菌表面塌陷、皱缩进而死亡.研究结果显示,Holin蛋白具有抑菌活性,这为进一步开发噬菌体抗菌制剂提供应用基础和技术支持.