日本血吸虫童虫裂解物对东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的筛选及阳性克隆分析

摘要

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为筛选和分析东方田鼠抗血吸虫抗性相关基因，以日本血吸虫童虫可溶性裂解物为探针，筛选东方田鼠肝脏噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选，特异性噬菌体得到有效富集(375倍)。随机挑取92个克隆进行序列测定，获得了19条EST序列。其中13个条EST序列与已知基因或表达序列标签同源，6个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性，为新的表达序列标签。将19个EST序列的阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养，其中4号(Genebank登陆号：EW968294)、13号(Genbank登陆号：EW968303)、14号(Genebank登陆号：EW968304)、15号(Genebank登陆号：EW968305)、18号(Genbank登陆号：EW968308)克隆均诱导了显著的杀虫效果。综合生物信息学分析结果及体外杀伤试验结果，编码CASP8和FADD类似性细胞程序性死亡调节蛋白、α-2-HS-糖蛋白、M4蛋白、具有R3H结构域的一种mRNA结合蛋白以及三种未知蛋白的编码基因(14、15、18号克隆)可能是东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因。本研究为进一步研究东方田鼠抗血吸虫机理奠定了基础。